我在做PCR时,有好多的引物,Tm值在40-62之间,不知道用什么温度比较好.

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/03 17:18:40

不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出Tm值是多少.在做PCR的时候,将退火温度设定的稍微低于Tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点.
当然,做PCR有一定的运气成分,同样的条件有时能扩出基因来,有时候却不能.一般来说,一直无法P出基因的话,首先就要检查引物设计是否有问题,如果没有问题,或者以前P出来过.那么检查下退火温度,多试几个温度.再就是Mg离子的浓度,模板不要太多.多尝试一下.
总之,设定退火温度的时候略微比Tm低一点,适当的调整,多多尝试,就好了.

你可以作一个退火温度的梯度，这样就可以非常方便的的到最优的退火温度了。

我在做PCR时,有好多的引物,Tm值在40-62之间,不知道用什么温度比较好. 最近在做实验RT-PCR,我做RT-PCR,一对引物Tm值分别是52.2,54.6.目的片段1062,PCR反应条件怎么设置呀 PCR中Tm值的疑问我有一段引物，比如NNNNNN，然后我在这段引物前面加了标记，所以是XXXXXNNNNN，那么它的Tm值会有变化么？关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? 同一模版DNA在进行PCR扩增时是不是需要不同的两种引物?为什么资料上说引物只要Tm值相似就行? 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? 我在做overlap PCR,两个片段一条736bp,一条255bp,20个重叠碱基,四个引物的TM值都是59度,两条都P出来了现在加入两端的引物,就是扩不出来1000的条带,这20重叠有13个是CG对,我不知道是不是退火温度的在做RT-PCR时,或者是一般的PCR时,退火温度怎么设置,退火温度和Tm值之间有怎么样的关系? 为什么pcr 引物设计出来,下游引物加上酶切位点和保护碱基后,有一个Tm值是负值呀?还有,好多的Tm值都代表什么呢?引物Tm60多,二级结构的Tm达到40度有关系吗?G值有什么用用基因组DNA做模板进行PCR扩增,设计引物所选序列也用cDNA为模板有什么不同是用这两个模板做pcr，在设计引物时，设计引物所用的序列有区别么请教如何计算出兼并引物的退火温度我是一个新手,如何根据公司送来的兼并引物的单子上的Tm值推出实际PCR时的退火温度呢?引物单子上有两个Tm值,分别是1M 钠离子,50mM钠离子条件下的Tm值.实 PCR引物设计中,引物上是否需要每个碱基都与模板链结合?为了得到想要的Tm值,或是保证长度,不产生二聚体等,可不可以有在引物上添加一些不配对的碱基?如下图：可以的话,会对扩增有影响么? 我在做PCR时需要人体GAPDH或β -actin 引物,我能不能用手头现有的鼠的GAPDH或β -actin引物代替?人和鼠的引物不同吗? 人体内DNA复制需要引物吗?在做PCR时,需要添加相应的引物,那么DNA人体内复制需要引物吗? 设计PCR引物时Tm温度有没有具体要求?比如说,Tm必须小于72度,或大于72度? 引物的Tm值是什么 PCR中两个引物的Tm值相差太大有什么害处? 如果从primer5中得到引物的tm 值怎么确定pcr温度